吉林医学２０１２年３月第３３卷第９期 ‘１７９５ ・实验研究・ 长期低剂量砷摄入对小鼠肾脏的影响 徐防，陈进（贵阳医学院附属医院，贵州贵阳５５０００４） ［摘要】目的：探讨长期低剂量砷摄入对小鼠肾脏的影响。方法：将３６只成年ｌ（ＩｖＩ小鼠，随机分成４组，每组９只，分别给予０ ｇ／Ｌ、 ２５ ｇ／Ｌ、１００ ｇ／Ｌ、４００ ｇ／Ｌ砷溶液作为其饮用水摄入。分别于６周、１２周、２４周称体重，尾静脉采血测定肾功能，并且每组随机处 死３只小鼠做肾脏病理检查。比较各组小鼠肾功能、体重及肾脏病理的改变。结果：在相同观察时点，随砷摄人浓度的增加，小鼠血 尿素氮及肌酐值明显升高，体重逐渐降低。在相同的剂量组下，０ Ｌ组和２５ ｇ／Ｌ组小鼠血尿素氮及肌酐值差异无统计学意义（Ｐ＞ Ｏ．０５），其体重随观察时间延长而明显增加，而１００ ｇ／Ｌ组和４００ ｅ／Ｌ组小鼠随观察时间的延长血尿素氮及肌酐值明显升高，体重明显 降低。０ ｇ／Ｌ组和２５ ｇ／Ｌ组小鼠的肾脏均无病理改变，１００ ｇ／Ｌ组和４００ 组小鼠的。肾脏有不同程度的病理学改变，主要为肾近曲 小管上皮细胞空泡变性，其病变程度随时间延长而加重。结论：长期低剂量砷摄入对小鼠肾脏的影响存在剂量时间效应，剂量越高，时 间越长，影响越大。 ［关键词】砷；肾；病理学；小鼠 饮水砷污染已成为严重危害人类健康的问题，全球至少超 表１各组的血尿素氮结果（ｉ± ，ｍｍｏｌ／Ｌ） 过２亿人因水中砷含量超标而处于砷摄入过量的危险中…。在我 国，饮水型砷暴露危险区域主要集中于内蒙古、山西、贵州等省 份，共有超过６０万人处于砷饮水污染中，超过３ ０００人有砷中毒 表现 】。目前对砷中毒的研究多集中于高剂量毒理学范畴，低剂 量砷对机体的影响研究甚少。研究选用ＫＭ／Ｊ￣鼠作为研究对象， 观察长期低剂量饮水型砷摄入对小鼠肾脏的影响。 注：与Ａ组比较，①Ｐ＜０．０５；与组内６周时比较，②Ｐ＜Ｏ．０５ １资料与方法 、表２各组的血肌酐结果（ ± ， ｍｏｌ／Ｌ） １．１一般资料：选取３６只成年雄性ＫＭ／Ｉ￣鼠，平均体重（２１．４８ ±２．１４）ｇ。适应性喂养２周后，随机分成Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ组，每组９ 只。Ａ组为对照组，其饮用水为蒸馏水。Ｂ、Ｃ、Ｄ组分别给予２５ ｇ／Ｌ、１００ ｇ／Ｌ和４００ ｇ／Ｌ的砷溶液作为其饮用水摄人。 １．２研究方法：分别于６周、１２周、２４周称体重，尾静脉采血测 定肾功能，并且每组随机处死３只小鼠做肾脏病理学检查。 注：与Ａ组比较，①Ｐ＜０．０５；与组ｐｈ６周时比较，②尸＜０．０５ １．３ 统计学处理：采用ＳＰＳＳ １ １．５统计软件包对数据进行统计学 重要的卫生问题。美国环保局已公布了饮水砷的卫生标准，旨在 分析。计量资料以均数±标准差（ ±Ｓ）表示，组间比较采用单 通过改水降砷措施达到保护人群健康，有效预防控制砷相关疾病 因素方差分析，以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。 发生的目的口】。有调查发现，饮用水中砷含量在１０ ５０ ｇ／Ｌ时仍 会使膀胱癌的患病危险增加【４】。另外，低水平砷（＜２００ ｇ／Ｌ） ２结果 暴露还与周围神经损伤、心脑血管疾病和糖尿病等疾病的发生有 ２．１组间肾功能的比较：在相同观察时间点，血尿素氮及肌酐 关 】。长期低剂量砷摄人对肾脏有何影响目前尚不清楚。本研究 值存在剂量效应，即随着砷摄入浓度的增加，血尿素氮及肌酐值 对低剂量砷摄入进行动物模型研究，结果显示：Ａ组及Ｂ组小鼠肾 明显升高。在相同的剂量组，Ａ组、Ｂ组血尿素氮及肌酐值差异 脏无病理改变；Ｃ组小鼠的肾近曲小管上皮细胞可见少量空泡样 无统计学意义（Ｐ＞０．０５），Ｃ组、Ｄ组随观测时间的延长血尿素 变，其病变程度６周＜１２周＜２４周；Ｄ组病变更为明显，有较多近 氮及肌酐值明显升高，见表１—２。 曲小管上皮细胞出现空泡变性，其病变程度６周＜１２周＜２４周； ２，２ 组间体重的比较：Ａ组及Ｂ组小鼠体重随观测时间延长而明 变性的细胞肿胀，胞质疏松，染色浅淡，细胞核固缩，部分细胞 显增加，而Ｃ组和Ｄ组则明显降低（Ｐ＜０．０５）。其降低的幅度Ｄ 与基底膜脱离。在相同观察时间点，随着砷摄入浓度的增加，血 组高于Ｃ组；随砷摄入浓度的增加，小鼠体重逐渐降低。 尿素氮及肌酐值明显升高。Ａ组、Ｂ组在不同的观测时间点血尿 ２．３ 病理结果：Ａ组及Ｂ组小鼠肾脏均没有病理改变，其肾脏结 素氮及肌酐值差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），Ｃ组、Ｄ组随观测 构清晰，肾近曲小管上皮细胞形态规则、结构正常。Ｃ组小鼠的 时间的延长血尿素氮及肌酐值明显升高。提示慢性低剂量砷摄入 肾近曲小管上皮细胞可见少量空泡样变，其病变程度６周＜１２周 对肾脏的影响存在剂量时间效应，剂量越高，时间越长，影响越 ＜２４周。Ｄ组病变更为明显，其病变程度６周＜１２周＜２４周，有 大。其机制可能是砷进入机体后通过肾脏途径排泄，随着进入体 较多近曲小管上皮细胞出现空泡变性，变性的细胞肿胀，胞质疏 内砷的增加 极易与肾脏的巯基结合，从而引起含巯基的酶、辅 松，染色浅淡，细胞核固缩，部分细胞与基底膜脱离。 酶和蛋白质的生物活性及功能发生改变，干扰细胞的能量代谢， 引起肾脏病理改变［６］。对此，还需进行毒理学方面的深入研究。 ３讨论 砷中毒是对人类危害极大的公共卫生疾病，可导致全身多器４参考文献 官的损害。ｗＨＯ和世界各国已将饮用水中砷对健康的影响视为 【１］Ｇａｉｌｅｒ Ｊ．Ｃｈｒｏｎｉｃ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ Ａｓ（１］Ｉ）ｉｎ ｍａｍｍａｌｓ：ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ １７９６ 吉林医学２０１２年３ｆ］第３３卷第９期 （ＧＳ）（２）ＡｓＳｅ（一）［Ｊ】．Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，２００９，９１（１０）：１２６８． ｄｒｉｎｋｉｎｇ ｗａｔｅｒ［Ｊ］．ｏｘｉＴｅｏｌ Ａｐｐｌ Ｐｈａｒｒｎａｃｏｌ，２００８，２３２（３）：４４８． ［５］Ｓｃｈｏｅｎ Ａ，Ｂｅｃｋ Ｂ，Ｓｈａｒｍａ Ｒ。ｅｔ ａ１．Ａｒｓｅｎｉｃ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｔ ｌｏｗ ｄｏｓｅｓ： ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｍｏｄｅ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｌ Ａｐｐｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００４，１９８（３）：２５３． ｆ２１ Ｓｕｎ Ｇ．Ａｒｓｅｎｉｃ ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｒｓｅｎｉｃｏｓｉｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏ！ Ａｐｐｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００４，１ ９８（３）：２６８． ［３】梁超轲，王汉章，马风，等．饮水砷卫生标准研究进展［Ｊ】．中国地 方病学杂志，２００３，２２（３）：２７３． 【４】Ｋｅｎｙｏｎ ＥＭ，Ｈｕｇｈｅｓ ＭＦ，Ａｄａｉｒ ＢＭ，ｅｔ ａ１．Ｔｉｓｓｕｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｕｒｉｎａｒｙ ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｏｒｇａｎｉｃ ａｒｓｅｎｉｃ ａｎｄ ｉｔｓ ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ ｉｎ Ｃ５７ＢＬ６ ｍｉｃｅ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｓｕｂｃｈｒｏｎｉｅ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｔｏ ａｒｓｅｎａｔｅ ｉｎ ［６孙贵范，６］李富君，李革新，等砷对小鼠肾脏毒性机理的探讨［Ｊ】．中 国地方病学杂志，１９９８，１７（５）：２８４。 ［收稿Ｆｔ期：２０１２，０１．１２编校：苏建东】 肺炎支原体感染大鼠气道反应性的实验研究 程燕，李晓丹，陈慧（天津中医药大学第二附属医院。天津３００１５０） ［摘要】目的：初步探索ＭＰ感染与哮喘之间的关系。方法；将４０只ＳＤ雄性大鼠随机分为四组。采用滴鼻法对实验大鼠进行ＭＰ感 染，并以１％ＯＶＡ溶液对其进行雾化吸入，诱导大鼠喘息的发作，观察肺组织形态改变。结果；总阳性率为９４．６％，且肺组织可见炎性 改变；经１％ＯＶＡ溶液雾化吸人后，大鼠出现类似支气管哮喘的表现，其ＢＡＬＦ中ＩＬ．４及ＩＦＮ 含量均升高，ＩＦＮ ／ＩＬ－４比值与其他各 组比较，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论：肺炎支原体感染大鼠气道存在慢性炎性反应及高反应状态，经ＯＶＡ溶液雾化激发后， 出现Ｔｈｌ／Ｔｈ２细胞功能的失衡，加重了气道高反应状态，出现喘息发作的症状。 【关键词】肺炎支原体；气道慢性炎．陛反应；气道高反应性；Ｔｈ ／Ｔｈ＋ Ｍｙｅｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｒａｔ ａｉｒｗａｙ ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｓｔｕｄｙ Ｈｕｉ（Ｓ￣ｃｏｎｄＡｆｉｌｆｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＴｉａｎｊｉｎ ＵｎｉｖｅｒｓｔＯＪｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｔｉａｑ．ｌｉ＇ｎ ３００１５０） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｔｈｅ ｒａｔ’ｓ ｒｅａｃｔｉｖｉＷ ｉｎ ｔｈｅ ａｉｒｗａｙ ｗｈｅｎ Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（ＭＰ）ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ，ｉｎｉｔｉａｌｌｙ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ＭＰ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｎｄ ａｈｅｔ ｂｒｏｎｃｈｉａｌ ａｓｔｈｍａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｆｏ啊ｍａｌｅ ＳＤ ｒａｔｓ ａｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｆｏｕｒ ｇｒｏｕｐｓ；ＭＰ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ、ＭＰ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ、ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｎＯ／Ｔｅａｌ ｃｏｎＷｏｌ ｇｒｏｕｐ．Ｔｏ ｉｎｆｅｃｔ ｈｅ ｔｒａｔｓ ｗｉｔｈ ＭＰ ｂｙ ｔｈｅ ｉｎｔｒａｎａｓａｌ ｍｅｔｈｏｄ。ａｎｄ ｉｎ＿ｈａｌｅ ｔｈｅｍ ｗｉｈ １％ＯＶＡ，ｔｔｈｅｓｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｃａｌｌ ｄｅｄｕｃｅ ｔｈｅ ｇａｓｐ ｏｆｔｈｅ ｒａｔｓ．Ａｆｔｅｒ ｋｉｌｌｅｄ，ｎ１ｅ ｒａｔｓ’ＢＡＬＦ ｗａｓ ｌｅａｖｉｎｇ ｆｏｒ ＭＰ・ＰＣＲ，ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｌＬ一４ ａｎｄ ＩＦＮ－ ；Ｔｈｅ ｌｕｎｇ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗｏｒｅ ｅｍｂｅｄｄｅｄ ｉｎ ｐａｒａｆｆｉｎ ｆｏｒ ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｎａｌａｙｓｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈ０ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｂｙ ＭＰ—ＰＣＲ ｗａｓ ９４．６％ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔｓ，ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｉｎｔｒａｎａｓａｌ ｍｅｔｈｏｄ ｗｉｈ ＭＰ ｃｕｌｔｔｕｒｅ ｆｌｕｉｄ。ａｎｄ ｔｈｅ ｌｕｎ８ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗｅｒｅ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｈｅ ｉｔｎｆｌｍｎｍａｔｏｒｙ ｃｈａｎｇｅｓ；ａｆｔｅｒ ｉｎｈａｌｅｄ ｂｙ １％ＯＶＡ，ｔｈｅ ｒａｔｓ ａｐｐｅａｒｅｄ ｔｈｅ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｌｉｋｅ ｔｈｅ ａ￣ａｃｋｓ ｏｆ Ｂｒｏｎｃｈｉａｌ ８ｓｍｍ‰ａｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ａｎｉｍａｌｓ’ＢＡＬＥｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｌＬ－４ ａｎｄ ＩＦＮ－ ｉｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ａｎｄ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ＩＦＮ一 ／ＩＬ－４ ｈａｄ ｓｏｍｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｒａｏｎｃｏ ｃｏｍｐａｒｅ ｗｉｈｔ ｈｅｔ ｏｔｈｏｒ ｇｒｏｕｐｓ（尸《Ｏ．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ａｉｗａｒｙ ｏｆ ｈｅ ｒａｔｓ ｉｔｎｆｅｃｔｅｄ ｂｙ ＭＰ，ｈａｄ ｔｈｅ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｏｆ ｅｈｒｏｎｉｏ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｎｄ ｈｙｐｏｒ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ．Ａｆｔｅｒ ｉａｈａｌｅｄ ｗｉｔｈ １％ＯＶＡ，ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｈ１／１广ｈ２ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｒｅ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔａｔｅ ｏｆ ｉｍｂａｌａｎｃｅｄ，ｈｉｓｔ ｃｈａｎｇｅ ｃａｒｌ ｍａｋｅ ｍｏｒｅ ｓｅｒｉｏｕｓ ｏｆ ｈｅ ｓｔｔａｔｅ ｏｆ ｈｙｐｅｒｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ ｉｎ ｔｈｅ ａｉｒｗａｙ，ｎｄ ａｃａｕｓｅ ｔｈｅ ａｔｔａｃｋｓ ｏｆＢｒｏｎｃｈｉａｌ ａｓｔｈｍａ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（ＭＰ）；Ｔｈｅ ｃｈｒｏｎｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｉｎ ｈｔｅ ａｉｗａｒｙ；Ｔｈｅ ｈｙｐｅｒ ｒｅｓＦＩｏｎｓｉｖｅｎｏｓ８ ｉｎ ｈｔｅ ａｉｒｗａｙ；Ｚｈｌ／Ｔｈ 肺炎支原体（ＭＰ）是儿童呼吸道感染的常见病原体之一． 多项临床研究发现肺炎支原体感染与儿童支气管哮喘之间存在着 密切的关系 。实验拟探讨感染肺炎支原体后大鼠气道反应性的 变化，并通过变应原刺激后，观察机体内相关细胞因子的变化情 况为揭示ＮＩＰ感染与支气管哮喘发病间的病理联系。 器，上海合力医疗器械厂｛Ｉｃｙｏｌｃｒ ＩＱ时实ＰＣＲ仪，Ｂｔｏ，Ｒａｄ中国 公司。 ｌ。３实验方法 １，３．１肺炎支原体的培养及菌数测定ｌ利用ｌ０倍稀释法将待测菌 液以培养基稀释成ｌ×ｌ０。。一ｌ×１０。。一系列浓魔，经３７℃恒温培 １资料与方法 １．１ 一般资料：选用４ ５周龄同批清洁级ＳＤ雄性大鼠４Ｏ只。体 养７ ｄ后，以培养纂由红色变为黄色时的最高稀释魔作为颜色改 变单位（ＣＣＵ），则菌液浓度以ＣＣＵ／ｍｌ计。 ｌ。３，２动物分组ｌ正常饲养动物Ｉ周，使之适应环境后 用随机 重１４０—１５０ ｇ。由天津实验动物中心提供，室温１８—２２￣Ｃ饲养， 自由饮水与进食。 数字法将太鼠随机分为４组：空白对照组、单纯激发组、ＭＰ感染 组、ＭＰ感染加激发组，每组各ｌＯ只大鼠。置于３级清洁动物室， 在标准条件下分笼饲养。 １．３．３动物操作：用１０％水合氯醛溶液按３００ ｍｇ／ｋｇ￣腔注射进行 麻醉，待动物完全麻醉后，用ｌ ｍｌ注射器将１０７ ＣＣＵ／ｍｌ的肺炎支 原体培养液缓慢地滴入ＭＰ感染组、ＭＰ感染加激发组动物鼻孔进 行滴鼻，空白对照组及单纯激发组动物予等量的培养基滴鼻，利 １．２主要试剂与仪器：肺炎支原体标准菌株（ＭＡＣ１２９），由 天津医科大学检验系惠赠；支原体基础培养基，购自中国药品生 物制品检定所；细菌ＤＮＡ提取试剂盒，北京天根生物制品有限 公司；卵清白蛋白，北京鼎国生物技术公司；ＩＬ．４和ＩＦＮ 检测 试剂盒，武汉中美科技有限公司；ＯＫＡ Ｃ．５１７型号高频超声雾化 基金项目：天津市卫生局科技基金项目Ｃ项目编号：０９ＫＺ１１７）
